很多技术和产品的创新由于各种原因无法或暂时无法发表研究论文（高影响因子论文和高价值专利评判标准的不同、保持新颖性的需要、保密技术细节的需要等），因此公开的专利信息就是跟踪最新技术和产品的重要渠道。

　　然而，中国的专利年申请量已接近500万件，如何从浩如烟海的专利资料中找寻到有价值的信息是一项具有挑战的工作。

　　本专栏将定期梳理最新公开的农业生物技术领域的发明专利，并就部分专利进行简单介绍，以为相关从业者提供有价值的信息参考。

　　今天让我们看看2023年第32周都公开了哪些农业生物技术相关的专利。

　　2023年第32周公开的

　　部分农业生物技术专利简介

　　关键词：大豆品质、水稻不育、玉米抗旱、甜菜碱合成

　　1、大豆品质

　　中国农业科学院作物科学研究所申请的专利2023105046655（发明人：邱丽娟;何梓莹;于莉莉;邱红梅;洪慧龙;高华伟）提供了一种用于构建大豆新品种的sgRNA组合及培育大豆新品种的方法和应用。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除大豆GmLOX1、GmLOX2、GmLOX3、GmFAD2 1A和GmFAD2 1B基因，获得具有高含量油酸和低含量脂氧合酶的大豆编辑材料。并根据变异位点信息开发分子标记对该变异材料进行快速精准鉴定。

　　南京农业大学申请的专利2023104474716（发明人：许冬清;宋昭庆;林欢;方正）公开了GmBBX4基因在调控大豆异黄酮合成中的应用。本发明通过对GmBBX4基因利用CRISPR Cas9基因编辑技术创制突变体和创制过量表达转基因大豆株系，发现GmBBX4基因编辑突变体大豆中的次生代谢产物含量显著提高，例如染料木苷、黄豆黄苷、丙二酰基染料木苷、丙二酰基黄豆黄苷和丙二酰基大豆苷进而提升大豆的品质。而GmBBX4基因过量表达大豆中的次生代谢产物含量显著下降。因此，在植物中进行GmBBX4基因的功能缺失是改进植物品质的有效方式。

　　2、水稻不育

　　华南农业大学申请的专利2023104979570（发明人：周海;洪好纳;张永杰;张颖哲;肖跃平）公开了与水稻温敏核雄性不育性状相关的分子标记及其应用。本发明提供一种与水稻温敏核雄性不育性状相关的分子标记dCAPS 1和dCAPS 2。dCAPS 1为利用引物对N1对水稻基因组DNA进行扩增，得到的242bp扩增片段，经NdeI酶酶切后得到25bp和217bp两个片段。dCAPS 2为利用引物对E1对水稻基因组DNA进行扩增，得到的246bp扩增片段，经EcoRI酶酶切后得到22bp和224bp两个片段。本发明提供的分子标记与水稻温敏核雄性不育性状显著相关，可应用于鉴别水稻温敏核雄性不育性状。

　　华中农业大学、湖北洪山实验室、湖北稻道鸿业生物科技有限公司和三明市农业科学研究院申请的专利2023104457354（发明人：张启发;欧阳亦聃;徐聪昊;黄显波）提供了一种水稻三明显性核不育基因SDGMS及其应用。本发明通过精细定位确定水稻三明显性核不育基因SDGMS的基因组位置。将SDGMS转化导入野生型水稻品种，可创造显性核不育系；同时提高SDGMS表达水平能够增加不育程度。本发明提供的SDGMS基因具有显性核不育的生物学功能，可调控水稻三明显性核不育性状。

　　3、抗旱玉米

　　四川农业大学申请的专利2023104997827（发明人：卢艳丽;徐洁;刘天红;唐鑫;王瑶;刘彦君;奉小菊;杨博;张潇月;吴锋锴;汪青军;冯宣军）公开了一种玉米基因ZmPOP10的Indel分子标记及其应用。本发明提供的Indel分子标记在干旱条件与正常浇水下均与玉米材料的根尖数显著相关。

　　扬州大学申请的专利2023107587491（发明人：徐扬;于广宁;周恺;张宇翔;李成;杨文艳;徐一亿;李芙蓉;关秀生;陈茹佳;鲁月;李鹏程;杨泽峰;徐辰武）公开了一种玉米耐旱基因位点的开发方法及应用。ZmReDroSNP0201492位点是玉米基因组中的一个SNP位点，其核苷酸种类为A或T，为序列表中SEQ ID No.1的第71位核苷酸；ZmReDroSNP1038761位点是玉米基因组中的一个SNP位点，其核苷酸种类为G或C，为序列表中SEQ ID No.2的第71位核苷酸。本发明开发了新的玉米耐旱基因位点，并利用KASP分型技术对耐旱基因位点进行快速基因分型，可用于玉米分子标记辅助育种。

　　四川农业大学申请的专利2023106457096（发明人：冯宣军;关华瑞;张维肖;汪青军;徐洁;吴锋锴;张少博;卢艳丽）公开了ZmARGOS9基因在玉米抗旱与高产中的应用。本发明将ZmARGOS9在玉米中过量表达发现，转基因植株的生长发育从萌发阶段就快于对照，产量增加，抗旱能力明显增强。因此，ZmARGOS9的过量表达可同时增加干旱条件下和正常条件下玉米的产量，此外还能适当缩短生育期。

　　4、甜菜碱

　　中国农业科学院烟草研究所（中国烟草总公司青州烟草研究所）申请的专利2023106495149（发明人：杨长青;武秀明;蒋勋;姚陆）涉及用于合成Betanin的基因组合及其应用。所述基因组合由DODA、CYP76AD1、5GT和ADH组成。利用所述的基因组合可以在烟草中高效合成Betaninn。

　　中国农业科学院棉花研究所申请的专利2022115233920（发明人：李付广;葛晓阳;王晔;王鹏;陈艳丽;袁佳辰）公开了一种粉红色棉花纤维和种子的转基因材料及其应用。本发明针对棉花密码子优化了CYP76AD1、L DOPA 4,5 dioxygenase、Betanidin 5 O glucosyltransferase三个基因的CDS序列，转化陆地棉材料，获得粉红色棉花纤维及种子的转基因植株。该粉红色转基因棉花纤维在成熟过程中呈现紫红色，随着纤维发育，紫红色逐渐变浅，最终成熟纤维呈现出不同程度深浅的粉红色。

　　5、其他

　　吉林省农业科学院申请的专利2023105143960（发明人：蔡勤安;魏嘉;马瑞;郭东全;郭东梅;鲁昕;于志晶;李源）公开了一种CasF2蛋白、CRISPR/Cas基因编辑系统及其在植物基因编辑中的应用。CasF2基因是Cas12j类型的Cas基因，具有长片段DNA序列删除的潜力。CasF2基因的PAM识别序列为：5’ TBN 3’（B＝G/T/C），并且CasF2对识别的靶序列位点特异性很高。CasF2编辑系统的靶序列为18bp。CasF2在基因组DNA上可编辑的位点更多和具有更加广泛的潜在目标靶点。

　　中国农业科学院油料作物研究所申请的专利2023104820916、2023105043178和2023105043144（发明人：师家勤;王汉中;王新发;刘贵华;梁华兵;詹杰鹏）涉及油菜千粒重关联的PARMS分子标记或标记组合的应用。

　　申请人筛选到千粒重关联位点qSW.A9 2、qSW.A9 3和qSW.A3 3、qSW.C3 3以及qSW.A1 2和qSW.C1 2。

　　qSW.A9 2和qSW.A9 3的峰值SNP标记Bn A09 p4509627和Bn A09 p7329993分别位于油菜A09染色体的第4,419,828和5,542,361位碱基处，平均可解释9.2%和7.0%的表型方差，平均效应为0.21和0.39克。利用这两个SNP开发的PARMS标记对油菜关联群体进行检测，发现其操作简便且分型清晰，而且两种纯合基因型千粒重的差值分别为0.24和0.40克，两者联合则高达0.53克，有良好的选择效果。

　　qSW.A3 3和qSW.C3 3的峰值SNP标记Bn A03 p14176469和Bn scaff_22067_1 p219321分别位于油菜A03染色体的第13,373,806和C03染色体的第20,819,936位碱基处，平均可解释6.3%和8.6%的表型方差，平均效应为0.30和0.22克。利用这两个SNP开发的PARMS标记对油菜关联群体进行检测，发现其操作简便且分型清晰，而且两种纯合基因型千粒重的差值分别为0.23和0.30克，两者联合则高达0.46克，有良好的选择效果。

　　qSW.A1 2和qSW.C1 2的峰值SNP标记Bn A01 p19633815和Bn scaff_17827_1 p897345分别位于油菜A01染色体的第16,462,971和C01染色体的第7,804,227位碱基处，平均可解释8.4%和6.4%的表型方差，平均效应为0.24和0.19克。利用这两个SNP开发的PARMS标记对油菜关联群体进行检测，发现其操作简便且分型清晰，而且两种纯合基因型千粒重的差值分别为0.21和0.29克，两者联合则高达0.47克，有良好的选择效果。

　　山西农业大学申请的专利2023106621654（发明人：张宝俊;刘旭;孙玉荣;张诺;张天瀚;王金叶;王雪;韩渊怀）公开了一种谷子抗白发病KASP分子标记引物、谷子抗白发病检测试剂盒及应用。本发明利用群体表型和生物信息学方法从谷子基因组中挖掘抗白发病基因并筛选优异单倍型，开发KASP抗病分子标记，克服了谷子抗白发病分子标记获取困难的技术问题；本发明使用从RILs群体中获取抗病优异单倍型位点，并开发KASP分子标记在自然群体中进行验证，测定结果真实可靠。

　　结案专利详察

　　波夫曼斯种植公司申请的专利2010800385875《能够提供热耐受性的转录调节因子的表达》（发明人：万江欣,黄雅凡）经实质审查后于2014年03月25日以权利要求1-15得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款为由被驳回。申请人于2014年07月09日向专利复审委员会提出了复审请求。合议组经过审查，做出了撤销原驳回决定的审查决定。今天，就让我们详细看看这个专利。

　　1、发明内容

　　本发明方法公开了一种增强碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b基因的表达或者活性的构建体及其方法，获得的过表达转基因植物的耐热性显著优于受体，从而能够降低花朵败育、增加植物产量。

　　2、驳回决定

　　国家知识产权局原审查部门于2014年03月25日以权利要求1-15得不到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款为由驳回了本发明专利申请，驳回决定所针对的权利要求书如下：

　　“1. 一种生产转基因植物的方法，该方法包括：利用载体使植物进行转化，其中所述的载体包括核酸构建体，该核酸构建体能够增强碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b基因所具有的表达或者活性，从而得到具有增强的碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b基因的表达或者活性的转基因植物，并且使植物进行生长，在这个的方法中能够制成一种植物，所述的植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性。”

　　驳回决定认为：1）权利要求1未限定bHLH亚组1b基因的核苷酸序列或其编码的氨基酸序列。本申请说明书中没有记载其他物种来源的bHLH亚组1b功能性验证的实施例。本领域技术人员都清楚，蛋白质/多肽的功能取决于其一级结构即氨基酸序列，编码氨基酸序列的核苷酸序列，其序列的结构的微小变化都可能导致多肽性能的改变甚至丧失。此外，不同物种之间，由于进化上的差异，常会导致同源蛋白的进化趋异，表现在蛋白结构、功能的改变，因此，对于物种间同源蛋白是否具备相同的功能必须通过实验进行验证，仅通过生物信息学依据基因序列相似性推测其功能是不行的。因此，除了阿拉伯芥bhlh亚组1b基因编码的多肽以外，是否存在其他用同源性方式限定的多肽，通过在植物中表达，从而使得植物相对于对照植物增强热胁迫耐受性，这些需要实验证据加以验证。

　　2）权利要求1未限定转基因植物的品种。本申请仅仅记载了转化携带有阿拉伯芥bHLH亚组1b基因的构建体，从而增强该基因的表达，获得的转基因阿拉伯芥与对照相比具有增强的热胁迫耐受性。实现上述发明目的的前提是：植物中存在利用bHLH亚组1b基因的同源物调控的热胁迫响应，即能够通过增强bHLH亚组1b基因的表达，从而赋予转基因植物干旱耐受性。然而，除了阿拉伯芥外，说明书中没有记载任何其他植物的bHLH亚组1b基因与热耐受性关联的证据。因此，本领域技术人员除了阿拉伯芥之外，无法确定将携带有阿拉伯芥bHLH亚组1b基因的构建体转化至任何一种植物中，均能够赋予该植物干旱耐受性。因此，本申请权利要求1无法得到说明书的支持，不符合专利法第26条第4款规定。

　　3、复审请求

　　申请人波夫曼斯种植公司（下称复审请求人）对上述驳回决定不服，于2014年07月09日向国家知识产权局提出了复审请求，同时修改了权利要求书，所作修改主要包括：新提交的权利要求1中限定了bHLH亚组1b基因的核苷酸序列为“编码选自bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的阿拉伯芥（Arabidopsis thaliana）碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b多肽的核酸序列”。

　　复审请求人认为：本申请已采用实验数据证明了增强阿拉伯芥bHLH亚组1b多肽（例如bHLH39或bHLH101）的表达或者活性，产生具有增强的热胁迫耐受性的转基因植物，并且测试结果显示了阿拉伯芥bHLH亚组1b多肽能够发挥功能以改进植物中的热胁迫耐受性，修改后的权利要求符合专利法第26条第4款的规定。复审请求时新修改的权利要求1如下：

　　“1. 一种生产转基因植物的方法，该方法包括：利用载体使植物进行转化，其中所述的载体包括编码选自bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的阿拉伯芥（Arabidopsis thaliana）碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b多肽的核酸序列，该核酸序列能够增强所述bHLH亚组1b多肽所具有的表达或者活性，从而得到具有增强的bHLH亚组1b多肽的表达或者活性的转基因植物，并且使所述转基因植物进行生长，在这个的方法中能够制成一种植物，所述的植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性。”

　　4、前置审查

　　经形式审查合格，专利复审委员会于2014年08月11日依法受理了该复审请求，并将其转送至原审查部门进行前置审查。

　　原审查部门在前置审查意见书中认为，权利要求1未限定转基因植物的品种，权利要求1中与阿拉伯芥并列的技术方案得不到说明书支持，因而坚持原驳回决定。

　　5、合议组审理

　　随后，专利复审委员会成立合议组对本案进行审理。

　　在上述程序的基础上，合议组认为本案事实已经清楚，可以作出审查决定。

　　6、复审决定

　　专利法第26条第4款规定，权利要求书应当以说明书为依据，清楚、简要地限定要求专利保护的范围。根据该项规定，如果所属技术领域的技术人员根据说明书记载的内容可以合理预测权利要求概括的技术方案都解决发明所要解决的技术问题，并达到相同的技术效果，则权利要求能够得到说明书的支持。

　　驳回决定和前置意见中指出：1）权利要求1未限定bHLH亚组1b基因的核苷酸序列或其编码的氨基酸序列。由于说明书中没有记载其他物种来源的bHLH亚组1b功能性验证的实施例，除了阿拉伯芥bhlh亚组1b基因编码的多肽以外的序列是否也能获得预期技术效果需要实验证据加以验证。

　　2）权利要求1未限定转基因植物的品种，而说明书中没有记载任何其他植物的bHLH亚组1b基因与热耐受性关联的证据。因此，本领域技术人员除了阿拉伯芥之外，无法确定将携带有阿拉伯芥bHLH亚组1b基因的构建体转化至任何一种植物中，均能够赋予该植物干旱耐受性。

　　对此，合议组认为：1）复审请求人于2014年07月09日提交的修改文本中已经进一步限定了bHLH亚组1b基因的核苷酸序列为“编码选自bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的阿拉伯芥（Arabidopsis thaliana）碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b多肽的核酸序列”，并且本申请说明书表7中记载了上述bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的具体指代。同时，说明书还记载，根据本领域的普通技术知识，转录因子是DNA结合蛋白质，其能够与特异性的启动子序列或者增强子序列进行相互作用，并且改变相关基因所进行的基因表达。在对一种刺激（例如是环境胁迫，营养状态或者病原体侵袭）所进行的应答中，转录因子能够同时对一组基因进行改变。本发明中碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）亚组1b基因转录调节因子的过表达生成的植物，相对于野生型的植物而言，具有改变的表型，例如增强的热胁迫耐受性，在热胁迫过程中减少的花朵败育，以及增加的产量。权利要求1所述序列来源均为阿拉伯芥的bHLH亚组1b，序列间同源性较高，并且本申请说明书实施例7记载了转基因阿拉伯芥Bhlh39品系比野生型阿拉伯芥表达bhlh39水平提高；实施例10-13公开了转基因阿拉伯芥bhlh39品系或bhlh101品系相对野生型表现出经过热胁迫之后降低的花朵败育以及干旱耐性；实施例14公开了转基因阿拉伯芥bhlh39品系经热胁迫后相对于野生型增加种子产量，由此可见，说明书中记载了bhlh亚组1b改变植物表型的机理描述，并提供了相应bhlh亚组1b中不同的序列并验证了其功能，本领域技术人员据此能够合理相信将权利要求1所述序列转入阿拉伯芥中使得阿拉伯芥植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性的可能性。

　　2）本申请实施例1记载了40多个品种中含有bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的同源序列，在单子叶和双子叶植物（如大米，玉米，短柄草，柳枝稷，高粱，甘蓝型油菜，芜菁）中都发现了其同系物；实施例2-6记载了如何制备适宜的构建体，对其他品种进行转化，制备得到经转化的植物；实施例7-14证明了阿拉伯芥bHLH亚组1b基因与热耐受性关联。由此可见，bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的同源序列在众多植物中广泛存在，其具体转化方法是本领域所公知的，并且阿拉伯芥为本领域公知的模型植物，在没有相反证据的情况下，本领域技术人员倾向认为，阿拉伯芥bHLH亚组1b基因在其他植物中也能够表达并建立与热耐受性的关联，即本领域技术人员可以合理相信将所述序列转入其他植物中使得植物相对于野生型对照植物而言具有增强的热胁迫耐受性的可能性。因此，本领域技术人员根据说明书记载的内容以及本领域的公知常识，不会因权利要求1未限定bHLH亚组1b基因的相关序列或未限定转基因植物的品种而无法预期其技术效果，驳回决定所述理由不成立。

　　基于以上事实和理由，合议组作出撤销国家知识产权局于2014年03月25日对本申请作出的驳回决定的审查决定。

　　7、总结

　　权利要求书应当以说明书为依据，说明书公开的范围不仅包括说明书记载的内容，也包括本领域技术人员根据说明书的记载可以合理推测或者根据常规实验确定的发明内容。

　　本案中，修改后的权利要求书没有限定转基因植物的品种，而说明书中仅记录了核酸构建体转化阿拉伯芥的实验数据，没有记载任何其他植物的bHLH亚组1b基因与热耐受性关联的证据。然而，实施例1记载了40多个品种中含有bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的同源序列，在很多单子叶和双子叶植物中都发现了同系物，且阿拉伯芥为本领域公知的模式植物，因此，在没有相反证据的情况下，完全可以合理推测将权利要求1所述核酸序列转入这些具有同源序列的植物中能够赋予转基因植物更强的热胁迫耐受性。所以，修改后的权利要求书能够得到说明书的支持。